火箭免疫电泳

2014-05-26

问题描述: 火箭免疫电泳

医生回答(2)

病情分析:火箭免疫电泳呈阳性反应。
火箭免疫电泳是用于检测特定抗原的一种技术手段,通过抗原-抗体之间的特异性结合来确定是否存在目标抗原。若检测结果显示为阳性,则表示样本中存在与所用抗体对应的抗原,这通常意味着患者体内存在相应的病原体感染或相关疾病的存在。但具体诊断还需结合临床表现及其他辅助检查结果进行综合分析。
如果患者的既往史中有输血、使用血液制品等可能暴露于外源性蛋白的历史,也可能会导致出现假阳性的结果。此外,某些药物也可能影响火箭免疫电泳的结果,因此在进行检测前应告知医生所有正在服用的药物。
在进行火箭免疫电泳时,应注意保护样品免受污染,并严格按照操作规程进行处理以确保结果准确可靠。对于确诊患者,建议进一步完善相关检查明确病因后积极治疗。

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病情分析:1、抗原、抗体浓度的选择
以分别固定抗原含量与抗体浓度的方法,选取最小抗原量与最低抗体浓度,在免疫电泳后能出现最清晰项端狭窄且尖的锥形沉淀峰,长达2~5cm者为标准。一般抗原用量为0.5~5微克,抗血清用量为5~10微升,稀释度于1:10~1:200之间进行选择。
2、预复琼脂玻板的制备
将溶化的1%预复琼脂用滴管加玻板上,使之能将表面覆盖即可,放于温箱内干燥(或自然干燥),即可用以制备凝胶板。
3、抗血清琼脂板制备
根据上述选择结果,取一定量抗血清与一定量融化并冷却至56℃的1.5%巴比妥缓冲琼脂混合,使抗血清的浓度为以上述方法选择出的最适浓度,浇制抗血清琼脂板。琼脂厚度为1~2mm,玻板大小可根据实验所需而确定。如用5×7.5cm大小玻板时,约需抗血清琼脂6ml.
4、打孔、加样
待琼脂凝固后,于距玻板一长边10mm处,以3mm孔径打孔器打孔一排,孔距5mm.于各孔中加入抗原液,每孔10微升。每次实验中应加入几个不同浓度的标准抗原以作对照。稀释范围包括标本含量的最高与最低水平。
5、电泳
将琼脂板置于电泳槽横梁上,加样端位于负极,以双层滤纸联接琼脂板与电泳槽内缓冲液(槽内缓冲液为0.06M pH8.6巴比妥缓冲液)。接通电源,板端电压3v/cm,电流强度3mA/cm,电泳5小时。
6、结果判定(电泳结果示意图点击展开)
电泳毕,取出琼脂板,依次用生理盐水、蒸馏水浸泡后,加1%鞣酸冲洗琼脂板,晾干,即可观察与测定结果。也可以常规蛋白质染色法染色后观测结果。测定结果的方法有两种:一是测量沉淀峰的高度(自孔中央至峰尖),以mm计;另一是以求积仪测量沉淀峰的面积,以mm2计。前者较简便,后者较准确。根据测定的结果,从标准曲线中计算出待检标本中的抗原含量。
7、标准曲线制定
用上述选择好的最适浓度抗血清制备琼脂板。打孔,加入合适比例的5~10个标准抗原浓度,反复试验10次,取每次电泳后所测定的沉淀峰高度(或面积)的平均值,绘出标准曲线。

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